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文庫(kù)構(gòu)建概念

DNA文庫(kù)構(gòu)建是二代測(cè)序技術(shù)的基礎(chǔ)，其目的是將待測(cè)定樣本的大片段基因組DNA片段化為小片段的DNA，之后在小片段DNA分子兩端添加測(cè)序接頭，形成能上機(jī)測(cè)序的有效文庫(kù)的過(guò)程。文庫(kù)構(gòu)建，*終是將待測(cè)的DNA或RNA樣本轉(zhuǎn)化為適合測(cè)序的文庫(kù)。

文庫(kù)構(gòu)建流程

1.打斷及末修: 將DNA或RNA打斷為適合測(cè)序平臺(tái)的片段大小并修復(fù)末端損傷

2.加接頭：在片段兩端加上特定的接頭序列

3.DNA純化：去除文庫(kù)中的雜質(zhì)，提高文庫(kù)質(zhì)量

4.文庫(kù)擴(kuò)增：通過(guò)PCR擴(kuò)增文庫(kù)，增加文庫(kù)的產(chǎn)量

5.文庫(kù)質(zhì)檢：評(píng)估文庫(kù)的質(zhì)量，包括文庫(kù)的濃度、片段大小分布、純度以及是否存在污染等，以確保文庫(kù)符合測(cè)序要求

文庫(kù)構(gòu)建方法

DNA建庫(kù)方法是分子生物學(xué)的實(shí)驗(yàn)原理，其本質(zhì)就是在待測(cè)片段兩端加上接頭的過(guò)程，由于NGS測(cè)序的應(yīng)用廣泛，不同應(yīng)用方向的文庫(kù)制備流程仍有較大差異，目前建庫(kù)方法包括以下四種。

1. 物理/酶切打斷建庫(kù)

通過(guò)物理或酶切打斷基因組DNA，然后通過(guò)連接酶將接頭連接到DNA片段上，*后通過(guò)PCR擴(kuò)增。這種方法可以有效保留樣本的幾乎所有基因組信息，適用于全基因組測(cè)序。包括TA連接接頭建庫(kù)、平末端連接接頭建庫(kù)、Swift法建庫(kù)！

2. 轉(zhuǎn)座酶建庫(kù)

轉(zhuǎn)座酶法建庫(kù)技術(shù)的關(guān)鍵是Tn5轉(zhuǎn)座子，Tn5轉(zhuǎn)座子是一種細(xì)菌轉(zhuǎn)座子，本質(zhì)是一段含有若干抗性基因和編輯轉(zhuǎn)座酶基因的DNA片段。轉(zhuǎn)座酶建庫(kù)利用Tn5轉(zhuǎn)座子將DNA片段化、末端修復(fù)、接頭連接等多步反應(yīng)轉(zhuǎn)變?yōu)橐徊椒磻?yīng)，大大縮短了建庫(kù)時(shí)間。起始量低至1ng，適用于珍貴的樣本或低核酸含量的樣本。

3. 雜交捕獲建庫(kù)

雜交捕獲根據(jù)核酸分子堿基互補(bǔ)配對(duì)原則，針對(duì)目標(biāo)區(qū)域設(shè)計(jì)特異探針，打斷基因組DNA,加上測(cè)序接頭后與探針雜交,將基因組DNA目標(biāo)區(qū)域捕獲下來(lái)，回收目標(biāo)DNA片段即可。

4. PCR擴(kuò)增子建庫(kù)

擴(kuò)增子建庫(kù)是指利用PCR反應(yīng)在待測(cè)DNA片段兩端加上接頭的方法，原理相對(duì)比較簡(jiǎn)單，只需要兩輪PCR和兩步純化就可以得到目標(biāo)區(qū)域的文庫(kù)，**步是含通用序列的引物與目標(biāo)區(qū)域結(jié)合，第二步通過(guò)PCR反應(yīng)連接測(cè)序接頭，使得構(gòu)建的文庫(kù)可以用于上機(jī)測(cè)序。

杭州麥伯生物技術(shù)有限公司長(zhǎng)期致力于NGS產(chǎn)品的研發(fā)和生產(chǎn)，針對(duì)illumina及華大平臺(tái)，麥伯推出高通量測(cè)序上游樣本文庫(kù)制備試劑盒，本文為大家推薦多款高質(zhì)量的NGS建庫(kù)試劑盒，供您選擇！

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